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Discrepancy in calls when running individual modified base pileup and combined modbase pileup

Aperta
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Valutazione

Difficoltà
4/5
Tempo stimato
3-5 giorni
Idoneità per principianti
45/100
Tipo di issue
Bug
Chiarezza
Abbastanza chiara
Stato di attività
Tranquilla
Stack tecnologico
rust

Direzione di ricerca

Start by reproducing the reported individual and combined modkit pileup runs using the commands and parameters in the issue, including --combine-mods, --modified-bases 5mC 5hmC, and the default filtering. Compare the resulting modified and canonical counts and logs; done means the discrepancy is explained or a reproducible defect is identified.

Scritto dal modello di indicizzazione a partire dal testo della issue.

Descrizione

troubleshooting

Dear @ArtRand,

I ran modkit pileup on the modbam files for analyzing 5mC and 5hmC individually as well as using the --combine-mods commands. The total global methylation reported is:

Image

I calculated this % using: % = (Total modified reads) / (Total modified + Total canonical reads) × 100

It is odd that the methylation % for 5mC and 5hmC are higher than those reported in the modkit output using the --combine-mods option. The complete command I ran for combined modification calls was:
$ modkitv0.6.1/dist_modkit_v0.6.1_481e3c9/modkit pileup --cpg --combine-strands --sampling-frac 1.0 --ref /PlasmoDB64_Pfalciparum3D7_Genome.fasta -t 8 /P55_sorted.bam --combine-mods ./P55_combinemh_CpG.bed --log ./P55.log --modified-bases 5mC 5hmC

The initial run generating individual 5mC and 5hmC values were run with default parameters (--filter-percentile 10).

If the case is such that the combined run used a stricter probability threshold, and so, reads that were weakly called as "m" or "h" individually got rejected when competing against each other... then how do we explain this phenomenon biologically?
Ideally, the combined run should give a methylation % either similar to or higher than that of the individual runs gave.

I request your assistance on the same.

Thank you.

Lingua principale
Rust
Stelle
274
Fork
33
Metriche di merge delle PR
Nessuna PR unita negli ultimi 30g

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